H5N2殷鉴不远H7禽流感防疫监控候鸟更要防杜劣质疫苗

中国H7N9禽流感当前 亦不可忽视本土H5N2

最近中国爆发H7N9禽流感动物传人的疫情，造成91人重症感染、17人死亡（截至4月23日）。当卫生署疾病管制局从中国取得H7N9病毒株，讨论由国光及基亚疫苗生产疫苗时，与基亚疫苗有合作关系的国家卫生研究院，日前也召开记者会公布台湾正在研发H5N2人用疫苗的制备情形。

与H7N9相比，去年台湾的养鸡场爆发几波H5N2高病原性禽流感疫情，虽仍只停留在动物感染阶段，尚未发展出动物传人的临床病例，但根据疾管局针对家禽工作者进行禽流感感染监测，血清学结果显示家禽类工作者体内带有H5N2病毒抗体的比例约占2.4%，远高于非家禽工作者，显示出目前流行之H5N2禽流感病毒对人类已有“无症状感染”的情形。

根据国卫院的新闻资料显示，2012年初台湾彰化及高雄等5个养鸡场所爆发的H5N2禽流感疫情，鸡只致病力测试显示病毒由低病原性转为高病原性，分析病毒的基因序列显示，近年流行于台湾的H5N2病毒株基因序列极为特殊，Hemagglutinin（HA）与Neuraminidase（NA）基因来自美洲的H5N2病毒，其余6段基因则来自台湾本土的H6N1病毒。

国卫院指出，这个基因序列特殊的H5N2病毒株，目前只在台湾侦测到，并且已成为台湾在地化病毒。只是究竟H5N2台湾株从何而来，国卫院的资料并未详明。

不过，根据许多学术研究资料推论，这个H5N2台湾株的形成，来自于对鸡只施打劣质H5N2疫苗，将原本只爆发于国外的H5N2禽流感病毒株带进国内，并且与长期存在于台湾养禽场的H6N1禽流感病毒产生基因重组，诞生了这个全世界独一无二的H5N2台湾株。

劣质疫苗 造就出独一无二的H5N2台湾株

这个外来H5N2禽流感本土在地化的过程，得从2004年说起。在2003年底之前，台湾养鸡场一直都未发现H5或H7亚型禽流感病毒的污染，但2004年1月动物防疫人员首度于彰化一处蛋鸡场分离出H5N2病毒，震撼了养鸡产业及兽医研究单位。随即嘉义、台南、南投、苗栗、桃园也相继发现H5N2病毒。

农委会家畜卫生试验所分析这些地区养鸡场所采集的H5N2病毒基因序列，都与第一次在彰化发现的相同，显示为同一病毒株。

虽然2003至2004年间爆发一连串H5N2低病原性禽流感疫情，不过家卫所研判引发鸡只死亡的原因，是鸡只混合感染慢性呼吸器病、大肠杆菌、传染性支气管炎等疾病，加上天气寒冷导致鸡只抵抗力衰弱所致。这些死亡鸡只检体虽然也同时验出H5N2病毒，但经过毒力鉴定为低病原性，对鸡只致死性并不高。

如何判定禽流感病毒是属于对禽类致死率高的高病原性或是致死率低的低病原性？根据世界动物卫生组织(OIE) 的定义，所谓高病原性禽流感（HPAI）是以判断H5或H7病毒株致病指数（IVPI）及分析HA切割位碱性氨基酸序列两种方法所决定。当实验鸡只静脉接种死亡率达75%以上或IVPI 大于1.2 者，表示为高病原。若鸡只静脉接种死亡率未达75%或IVPI低于1.2，必须解读病毒的HA蛋白切割位氨基酸序列，来决定病毒是否具有潜在的威胁性。

不过当年基于“高规格防疫”的标准，担心H5N2禽流感病毒会出现高度变异性，即使判定为低病原性，农委会防检局仍采取整场扑杀手段，希望阻断病毒突变的机会。

但是令家卫所实验人员不解的是，这些采集的H5N2病毒株经过基因序列分析，发现“是具有美洲病毒群的表面抗原及欧亚洲病毒群之内部结构的重组病毒，根据病毒演化的证据及病毒主要抗原，与目前主要用来制造疫苗的病毒株，有高度相似性及相同特征，显示这并非自然产生的病毒株，推论应该来自于劣质疫苗肇祸。”

虽然怀疑这波禽流感是劣质疫苗肇祸，当年防检局追查最早发现H5N2弱毒株的彰化芳苑与嘉义新港鸡只感染来源，仍然朝向四个可能性追查，分别是候鸟携带、境内留鸟带毒、带毒禽鸟排泄物污染或人将病毒带往不同养禽场，包括私打禽流感疫苗引发。

在候鸟或境内留鸟带毒方面，防检局委托台北市野鸟学会在台北关渡、宜兰兰阳溪口、台南七股与金门监测，每次采得的禽流感病毒种类都不同，但同属弱毒性。在此波疫情前，尚未侦测过H5型的病毒。因此候鸟传染H5N2病毒予彰化芳苑与嘉义新港鸡只的可能性已降低。

在国内带毒禽鸟传染方面，虽然家卫所2003年分别在宜兰与台南县的鸭场检出H5N2及H7N7低病原性禽流感病毒，怀疑病毒是否因人车移动传播，由水禽转移至陆禽；不过先前检测出的H5N2病毒株属于亚洲型，与从彰化芳苑与嘉义新港的美洲型病毒株不同，因此这个可能性几已排除。

家卫所鉴定结果发现，彰化与嘉义两个感染场的H5N2病毒株核酸序列相似度高达99%，可推断为同一种病毒株；再比对世界病毒基因库，发现两处病毒株无论H抗原或N抗原，皆与1994年在墨西哥爆发的H5N2高病原性禽流感疫情时，在野外采集的病毒株高度相似，因此建议防检局将病毒来源朝向业者私打禽流感疫苗追查。

当年家卫所专家表示，禽流感疫苗为“不活化疫苗”，全球只有香港、墨西哥与智利使用。鸡只施打疫苗虽可降低死亡率，却无法完全抑制病毒在体内复制，病毒仍可藉粪便或分泌物排出体外；此外，禽流感疫苗的研发追不上病毒变异速度，因此多数国家发现禽流感，都采扑杀一途。

由于当时香港与墨西哥有H5N2不活化疫苗上市，因此防检局宣称要派人到港、墨等地搜集禽流感疫苗，交由家卫所进行核酸序列分析，分析结果若与彰化芳苑与嘉义新港鸡场检体相符，即可确定业者私打疫苗。

其实不只家卫所实验室的分析结果指向劣质疫苗，当年的中华民国养鸡协会秘书长冯诚万也推测，那几年邻近国家相继爆发H5N1高病原性禽流感，某些业者可能担心鸡只受感染，所以私下购买H5N2疫苗为鸡只施打 (当时并无H5N1动物疫苗)。走私疫苗品质不良，可能灭毒不完全，施打后反而感染鸡只，将国外禽流感病毒带入，他要求政府及早抓出害群之马。

不过，随着疫情降温，再加上政府追查劣质疫苗的来源没有进展，H5N2禽流感似乎被社会淡忘。即使如此，相关学术研究并未停止。

当美洲H5N2遇上台湾H6N1

攻读中兴大学兽医学博士的家卫所副研究员李敏旭，在禽流感专家谢快乐教授的指导下，2007年12月完成“台湾家禽流行性感冒病毒之特性与分子诊断”的研究，对早在1972年起即常见于台湾鸡群的H6N1禽流感病毒与2004年才在台湾发现的H5N2禽流感病毒进行分析。他除了分析出台湾发现的H6N1病毒株与中国、香港的H6N1不同，也再次确认台湾的H5N2病毒是美洲病毒群的表面抗原及欧亚洲病毒群内部结构的重组病毒，也就是推论病毒来自劣质疫苗。

李敏旭的研究也指出，长期存在台湾养禽场的H6N1病毒株虽然属于低病原性，但实验发现，有一些H6N1病毒株在未经驯化的状况下，可以在小白鼠身上复制，显示这些病毒具有跨物种造成哺乳动物感染的潜在危险。

令人担忧的是，先前台湾所分离的大部分H5N2病毒株内部基因，与适应在台湾鸡群的H6N1病毒株相似，若两种病毒在鸡群中循环，可能加速其适应在鸡群并提高病毒复制力，并可能进一步跨越宿主障碍，感染其他物种的动物。

李敏旭的博士研究言犹在耳，H5N2禽流感疫情在2004年底降温后，2008年10月又卷土重来。2008年10月高雄一处养鸡场又传出鸡只死亡的案件，经过采集检体，发现带有H5N2病毒。

经过分析，这株H5N2病毒与2003年采得的病毒株一样为美洲基因群与欧亚基因群重组的病毒株，进行毒力鉴定时，发现病毒的血球凝集蛋白切割位具有4个碱性氨基酸，已具有高病原性禽流感病毒的特征性，但进行静脉接种病原指数为0.89，却低于OIE规定的1.2。也就是说，这株病毒虽未达高病原性的标准，却显示病毒的毒力正往高病原性演化。

由于2008年高雄的H5N2禽流感案，在判定高病原性或低病原性方面，出现了模棱两可的情况，一度先判定为高病原性，后又改口为低病原性，因此被外界怀疑有隐匿疫情之嫌。但无论如何，令研究人员讶异的是，都是同种基因组成的H5N2，2008年发现的病毒株毒力竟然较2003年底首例发现的病毒株增强。

如前所述，世界动物卫生组织(OIE) 定义，所谓高病原性禽流感（HPAI）是以判断H5或H7病毒株致病指数（IVPI）及分析HA切割位碱性氨基酸序列两种方法所决定。当实验鸡只静脉接种死亡率达75%以上或IVPI 大于1.2 者，表示为高病原。若鸡只静脉接种死亡率未达75%或IVPI低于1.2，必须解读病毒的HA蛋白切割位氨基酸序列，来决定病毒是否具有潜在的威胁性。

而从2003年12月底于彰化县某处蛋鸡场发现的国内首例H5N2疫情，持续至 2004年2月共有 21 场病毒阳性被检出。该次疫情所分离的病毒株的IVPI值接近0.0，对鸡只几乎没有任何病原性，病毒的 HA 切割位氨基酸序列为（-REKR-），被认定为低病原性禽流感。

但2008年高雄分离的H5N2病毒株 IVPI 值增加为0.89，切割位序列上碱性氨基酸增加为-RKKR- [4]，已有高病原性的特征。

根据国外经验，许多高病原性禽流感的爆发，都有明确证据证实病毒都是由低病原性演化而来，例如美国宾州1983-1984 年的H5N2发生例、墨西哥2004年H5N2发生例及意大利1999-2000年H7N1发生例等，因此家卫所研究员郑明珠选取2003 年12月台湾爆发首例的H5N2病毒株，以感染14日龄鸡胚胎来模拟感染宿主鸡只，每次感染 60 枚鸡蛋来模拟鸡场中群体感染的状态，以连续累代感染方式，模拟病毒在养鸡场内累代循环后，病毒的演化趋势。

在这项模拟试验中，发现这株台湾特有的H5N2禽流感病毒，在模拟鸡只繁衍至第40与50世代时，病毒株致病指数（IVPI）都大于世界动物卫生组织明定的1.2，对鸡只死亡率达 100%，证实病毒已发展为高病原性。

郑明珠认为，实验结果显示，这个台湾特有的H5N2病毒株，可以让鸡只静脉接种致死率从0%演变为100%，显示这个病毒株就算是低病原性的，但是有发展为高病原性的潜力，对鸡群具有潜在威胁。

面对H5N2 也应“料敌从宽、御敌从严”

而在现实环境中，2008 年在高雄发现H5N2禽流感病毒，虽然判定为低病原性的，但其他实验分析证实是具有潜在威胁性的低病原性禽流感病毒株，与郑明珠在实验室的设计，方向一致。因此郑明珠建议当在鸡场发现这个台湾特有的H5N2病毒株时，在临床的控制上，应该尽量清除病毒，降低病毒在鸡场中有累代循环的机会。

目前防检局处理鸡场感染H5N2病毒，除了先采取移动管制与消毒，若最后判定为高病原性，才采取整场扑杀，与2003-2004年一旦发现低病原性H5N2就扑杀的高规格处理不同。然而根据实验室对H6N1、H5N2的感染模式与毒力变化研究，以及卫生署疾管局对家禽类工作者体内的H5N2病毒抗体监测，都突显H5N2病毒的威胁仍不可忽视。

此外，从外来H5N2病毒因不肖业者向鸡农兜售非法劣质疫苗施打，导致外来H5N2与本土H6N1产生基因重组，创造出台湾特有的H5N2病毒株，这个过程，不但重创了台湾家禽产业，使台湾从高病原禽流感非疫区被除名，更重要的是，对国内公共卫生带来无可预期的威胁。

值此中国爆发人类感染H7N9禽流感疫情之际，官方除了加强监控候鸟带病毒的状况外，也应切实查缉非法劣质疫苗，避免H7系列禽流感病毒循着H5N2的模式，再次入侵台湾的家禽产业。

参考资料

国家卫生研究院电子报第500期─新型流感H5N2人用疫苗株之制备

李敏旭，中兴大学兽医学博士学位论文〈台湾家禽流行性感冒病毒之特性与分子诊断〉，2007.12

郑明珠，台大兽医专业学院兽医学研究所博士论文，〈台湾禽流感病毒特性、变异与野鸟感染之监测〉，2011.7.1

郑明珠、李敏旭、李淑慧、王金和，〈14 日龄鸡胚胎累代感染造成之 H5N2低病原性家禽流行性感冒病独毒力变异〉，台湾兽医志J37(3) 221-226, 2011。